Problemas de amplificação

1. Quais problemas podem surgir da amplificação por PCR?
2. Por que não há amplificação no PCR?
3. O que causa a amplificação em PCR?
4. O que causa a falha de PCR?

Quais problemas podem surgir da amplificação por PCR?

Muitos dos problemas comuns com PCR e RT-PCR são identificados durante a eletroforese em gel de agarose dos produtos da reação. Estes incluem a ausência do produto de amplificação esperado, a presença de produtos inespecíficos, manchas excessivas e a presença de uma banda de "dímero de primer".

Por que não há amplificação no PCR?

A enzima DNA polimerase não funciona

A enzima DNA polimerase é responsável pela extensão dos primers ligados ao longo das fitas de DNA molde. Se esta enzima não for mais tão eficiente, talvez devido ao congelamento-descongelamento, a etapa de extensão durante a reação de PCR será incompleta, não fornecendo nenhum produto de PCR.

O que causa a amplificação em PCR?

PCR básico. O processo de PCR foi originalmente desenvolvido para amplificar segmentos curtos de uma molécula de DNA mais longa (Saiki et al. 1985). Uma reação de amplificação típica inclui DNA alvo, uma polimerase de DNA termoestável, dois oligonucleotídeos primers, desoxinucleotídeos trifosfatos (dNTPs), tampão de reação e magnésio.

O que causa a falha de PCR?

Normalmente, a primeira coisa que os pesquisadores fazem é culpar uma enzima ou reagente defeituoso quando um experimento falha, mas com o PCR é menos provável que seja a causa do fracasso. Mais frequentemente, problemas internos mais profundos, como design de primer, parâmetros de termociclador ou ligação não específica a outras sequências de modelo são a causa.