Sem amplificação pcr

1. Por que não há amplificação no PCR?
2. Por que meu DNA não amplificou?
3. O que acontece se os primers não forem adicionados ao PCR?
4. Como você corrige a amplificação não específica em PCR?

Por que não há amplificação no PCR?

A amplificação insuficiente pode resultar se a quantidade inicial de modelo for muito baixa. Aumente o número de ciclos de amplificação em incrementos de 5 ou, se possível, aumente a quantidade de modelo. Contaminantes na mistura de dNTP podem levar à amplificação incompleta ou incorreta ou inibição da PCR. Use dNTPs de alta qualidade.

Por que meu DNA não amplificou?

1) você pode ter um projeto de primer ou padronização de reação ruim (então, avalie seu projeto de primer e faça, como outros já disseram, um gradiente PCR para avaliar diferentes tempos de recozimento); 2) Sem DNA (seu protocolo de extração pode ter falhado) e, portanto, seus primers só podem se anular (ou entre eles).

O que acontece se os primers não forem adicionados ao PCR?

Pergunta: Se você se esquecesse de adicionar os primers à sua reação de PCR, o que aconteceria e por quê? 1. Sua reação iria falhar porque a Taq polimerase não pode adicionar bases sem um pequeno pedaço de DNA já presente. ... Sua reação iria falhar porque não haveria enzima que pudesse adicionar novas bases de nucleotídeos.

Como você corrige a amplificação não específica em PCR?

Use menos ciclos quando a concentração do modelo for alta e use mais ciclos quando a concentração do modelo for baixa. 2. O tempo de extensão foi muito longo: o tempo de extensão excessivo pode permitir amplificação inespecífica. Geralmente, use um tempo de extensão de 1 min / kb.