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Ajuste as temperaturas de recozimento, pois altas concentrações de aditivos de PCR ou co-solventes enfraquecem a ligação do primer ao alvo. Aumente a quantidade de DNA polimerase ou use DNA polimerases com alta processabilidade.
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- Erros de sequência nos terminais dos produtos de PCR.
- Amplificação de falso positivo.
- Recursos.
- Quais são as soluções de problemas comuns que podem ocorrer na PCR?
- Por que meu PCR não está funcionando?
- O que causa manchas de PCR?
- O que acontece se a temperatura de recozimento for muito alta?
Quais são as soluções de problemas comuns que podem ocorrer na PCR?
Guia de solução de problemas de PCR
| Problema | Causas |
|---|---|
| Rendimento de produto de PCR baixo ou nenhum | As temperaturas de recozimento e extensão do programa do termociclador não são ideais |
| A reação está sem Taq polimerase ou outro componente da reação | |
| Concentração do primer muito baixa | |
| A sequência alvo não está no modelo de DNA |
Por que meu PCR não está funcionando?
O esquecimento de apenas um componente da reação de PCR, seja a DNA polimerase, os primers ou mesmo o DNA molde, resultará em uma reação malsucedida. A solução mais simples é repetir a reação. ... Se ainda não houver produto de PCR depois disso, é provável que haja algo mais impedindo sua reação.
O que causa manchas de PCR?
Contaminação de DNA, RNA na amostra de DNA, alta concentração de DNA na reação de PCR pode causar manchas. ... Mancha de DNA geralmente causada em plantas devido à alta concentração de DNA modelo.
O que acontece se a temperatura de recozimento for muito alta?
A temperatura de recozimento estava muito alta
Se a temperatura de recozimento for muito alta, os primers são incapazes de se ligar ao modelo. A regra é usar uma temperatura de recozimento 5 ° C mais baixa do que a Tm da cartilha.
